實用神經(jīng)科學基礎研究新技術

第一篇神經(jīng)科學研究基本操作技術
第一章體外神經(jīng)細胞組織的取材和培養(yǎng)2
第一節(jié)神經(jīng)細胞學2
一、神經(jīng)元的分離、培養(yǎng)2
二、神經(jīng)膠質(zhì)細胞的分離、培養(yǎng)5
三、神經(jīng)干細胞的概念及培養(yǎng)8
四、嵌合體細胞及其培育10
五、神經(jīng)組織細胞的篩選13
六、常見體外神經(jīng)組織細胞的病理模型19
七、神經(jīng)細胞的測定指標與方法22
第二節(jié)神經(jīng)組織學33
一、腦組織切片的制備33
二、腦組織標本的取材與檢測36
第三節(jié)人腦類器官培養(yǎng)方法48
一、體外BBB模型49
二、3D擬胚體法培養(yǎng)腦類器官54
三、區(qū)域特異性腦類器官55
參考文獻59
第二章神經(jīng)營養(yǎng)因子研究方法62
第一節(jié)重組人腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子的純化和鑒定62
第二節(jié)睫狀神經(jīng)營養(yǎng)因子的cDNA克隆、表達、純化及其生物活性鑒定63
第三節(jié)紋狀體源性神經(jīng)營養(yǎng)因子的純化64
第四節(jié)神經(jīng)營養(yǎng)因子Neurturin在畢赤酵母中的高效表達、純化及活性鑒定66
第五節(jié)膠質(zhì)細胞源神經(jīng)營養(yǎng)因子基因克隆及產(chǎn)物純化68
參考文獻70
第三章神經(jīng)遞質(zhì)、調(diào)質(zhì)和神經(jīng)肽檢測方法71
第一節(jié)單胺類神經(jīng)遞質(zhì)檢測71
第二節(jié)褪黑素檢測73
第三節(jié)組胺檢測74
第四節(jié)腦內(nèi)啡肽檢測75
第五節(jié)腦內(nèi)氨基酸檢測76
參考文獻77
第四章受體研究方法78
第一節(jié)原位雜交78
一、基本定義78
二、研究應用78
三、原位雜交技術步驟78
四、熒光原位雜交實驗的步驟82
第二節(jié)其他受體研究方法——免疫組織化學染色技術82
一、取材83
二、固定83
三、脫水、透明、浸蠟、包埋83
四、切片84
五、染色84
六、拍照85
七、注意事項85
參考文獻86
第五章基因研究方法87
第一節(jié)單細胞/單核RNA測序87
一、基因差異表達分析87
二、反向遺傳90
第二節(jié)轉(zhuǎn)錄組學90
參考文獻91
第二篇神經(jīng)科學研究相關新技術
第六章神經(jīng)信號分子定量檢測技術94
第一節(jié)微透析技術94
一、腦微透析基本原理94
二、微透析系統(tǒng)及其特點95
三、微透析技術的應用95
第二節(jié)高效液相色譜96
一、HPLC操作流程96
二、等度和梯度洗脫96
三、應用97
第三節(jié)質(zhì)譜97
一、質(zhì)譜在神經(jīng)肽類中的應用97
二、質(zhì)譜在蛋白質(zhì)組學中的應用98
三、質(zhì)譜在單個神經(jīng)元RNA修飾中的作用98
四、質(zhì)譜在單神經(jīng)細胞中的應用98
五、質(zhì)譜成像98
第四節(jié)同位素示蹤技術99
一、放射性同位素示蹤99
二、穩(wěn)定性同位素示蹤101
三、在腦代謝中的應用101
第五節(jié)電化學及熒光成像技術103
一、電化學103
二、熒光成像法103
參考文獻109
第七章神經(jīng)電生理檢測112
第一節(jié)膜片鉗技術概述112
一、膜片鉗技術基本介紹112
二、膜片鉗中的電極112
第二節(jié)膜片鉗技術的應用115
一、膜片鉗實驗基本流程115
二、溶液配制116
三、離體腦片制備及培養(yǎng)117
四、離體腦片膜片鉗記錄117
五、在體動物準備117
六、應用118
七、膜片鉗技術的新發(fā)展118
參考文獻120
第八章神經(jīng)細胞標記及示蹤的新方法121
第一節(jié)轉(zhuǎn)基因動物成像法121
一、轉(zhuǎn)基因技術示蹤121
二、成像試劑123
三、在體動物成像技術應用進展124
四、發(fā)展前景125
第二節(jié)活體導入標記方法（電穿孔質(zhì)粒導入）125
一、電穿孔基因轉(zhuǎn)染的特點126
二、操作條件及注意事項126
三、電穿孔基因轉(zhuǎn)染技術的應用127
四、電穿孔的研究進展129
五、在體電穿孔技術的問題129
第三節(jié)病毒示蹤技術130
一、病毒工具的使用原則131
二、用于神經(jīng)環(huán)路示蹤的工具病毒133
三、用于細胞標記和基因傳遞的病毒載體133
四、神經(jīng)環(huán)路示蹤136
參考文獻140
第九章電極記錄新技術143
第一節(jié)多通道微電極143
一、多通道微絲電極144
二、薄膜電極145
第二節(jié)電極陣列146
一、微電極陣列146
二、超薄絲綢電極陣列150
三、猶他電極陣列151
參考文獻155
第十章光學測量新技術157
第一節(jié)熒光成像157
一、常用試劑配制157
二、常規(guī)試驗操作157
第二節(jié)新型熒光探針158
一、鋅離子熒光探針158
二、分子信標159
三、熒光探針的一般設計原理160
第三節(jié)鈣成像技術161
一、鈣指示劑162
二、鈣指示劑入胞途徑164
參考文獻166
第十一章顯微成像新技術167
第一節(jié)電子顯微鏡技術167
一、透射電子顯微鏡167
二、掃描電子顯微鏡167
三、電子顯微鏡的應用進展167
第二節(jié)超分辨率光學顯微技術170
一、受激輻射損耗超分辨顯微技術171
二、光激活定位顯微技術171
三、隨機光學重構顯微技術173
四、DNAPAINT技術174
五、結(jié)構光照明顯微技術174
第三節(jié)寬場照明成像技術176
一、寬場顯微鏡分類177
二、觀察方式177
參考文獻180
第十二章生物成像技術182
第一節(jié)激光掃描共聚顯微鏡182
一、生物樣品制備注意事項182
二、一般流程183
三、優(yōu)缺點184
四、應用185
第二節(jié)磁共振成像188
一、磁共振成像188
二、梯度回波同、反相位成像189
三、磁共振水成像技術190
四、磁共振彌散成像技術191
五、磁共振血管成像技術192
六、磁敏感加權成像技術193
七、磁共振灌注加權成像技術194
八、氫質(zhì)子磁共振波譜成像技術195
九、氧化鐵基顆粒追蹤特定細胞并跟蹤其體內(nèi)分布197
十、功能磁共振成像199
第三節(jié)X射線、CT、ECT、SPECT204
一、X射線成像204
二、計算機體層成像206
三、發(fā)射型計算機斷層掃描208
第四節(jié)腦磁圖成像215
一、腦功能區(qū)定位216
二、腦功能區(qū)疾病監(jiān)測217
三、腦功能區(qū)病變217
第五節(jié)多光子成像219
一、活體小鼠薄顱顱窗成像技術219
二、星形膠質(zhì)細胞成像220
三、脊髓背根神經(jīng)節(jié)成像221
四、三光子顯微鏡222
參考文獻223
第十三章光遺傳學技術225
第一節(jié)光遺傳學技術概述225
一、光遺傳學技術簡介及由來225
二、實驗工具箱226
第二節(jié)互補性技術229
一、電生理學229
二、活動成像229
第三節(jié)應用及展望231
一、應用231
二、前沿及展望231
參考文獻233
第十四章神經(jīng)環(huán)路圖譜繪制234
第一節(jié)單細胞分析235
第二節(jié)多模態(tài)分析238
一、跨物種分析238
二、空間組織圖239
三、電生理學和形態(tài)學表型242
第三節(jié)連接圖譜242
參考文獻246
第三篇常見神經(jīng)系統(tǒng)疾病
第十五章腦血管病248
第一節(jié)發(fā)病機制、臨床診斷及治療措施248
一、發(fā)病機制248
二、臨床診斷248
三、治療措施249
第二節(jié)腦血管病相關動物模型250
一、腦缺血模型250
二、腦出血模型251
參考文獻253
第十六章腦損傷254
第一節(jié)發(fā)病機制、臨床診斷及治療措施254
一、發(fā)病機制254
二、臨床診斷254
三、治療措施255
第二節(jié)腦損傷模型及評價255
一、腦損傷動物模型的建立255
二、模型評價256
參考文獻256
第十七章腦膠質(zhì)瘤258
第一節(jié)分類標準258
第二節(jié)影像學診斷與指導258
第三節(jié)治療措施259
一、手術治療259
二、藥物治療260
第四節(jié)腦膠質(zhì)瘤動物模型建立及評價262
一、動物模型建立262
二、動物模型評價263
參考文獻264
第十八章阿爾茨海默病265
第一節(jié)發(fā)病機制、臨床診斷及治療措施265
一、發(fā)病機制265
二、臨床診斷265
三、治療措施266
第二節(jié)AD相關動物模型266
一、轉(zhuǎn)基因小鼠模型266
二、慢病毒和基因敲除的動物模型267
參考文獻267
第十九章帕金森病269
第一節(jié)發(fā)病機制、臨床診斷及治療措施269
一、發(fā)病機制269
二、臨床診斷270
三、治療措施270
第二節(jié)PD常見動物模型271
一、神經(jīng)毒性模型271
二、殺蟲劑/除草劑模型273
三、遺傳模型274
參考文獻274
第二十章精神類疾病276
第一節(jié)發(fā)病機制、臨床診斷及治療措施276
一、發(fā)病機制276
二、臨床診斷276
三、治療措施276
第二節(jié)常見精神類疾病動物模型276
一、抑郁癥動物模型276
二、焦慮動物模型278
參考文獻278
第二十一章神經(jīng)性疼痛280
第一節(jié)周圍神經(jīng)損傷模型280
一、軸切模型（完全橫斷坐骨神經(jīng)）280
二、慢性壓迫性損傷281
三、部分坐骨神經(jīng)結(jié)扎（PSL/Seltzer模型）281
四、脊神經(jīng)結(jié)扎281
五、選擇性神經(jīng)損傷模型282
六、脛腓神經(jīng)橫斷模型282
七、腓總神經(jīng)結(jié)扎術283
八、坐骨神經(jīng)冷凍性松解術283
九、尾干切除術283
十、坐骨神經(jīng)炎283
十一、坐骨神經(jīng)疼痛的套扎284
十二、光化學性坐骨神經(jīng)損傷284
十三、激光誘導的坐骨神經(jīng)損傷285
第二節(jié)中樞疼痛模型285
一、體重下降或挫傷性脊髓損傷（艾倫模型）285
二、興奮毒性脊髓損傷285
三、光化學SCI285
四、脊柱半橫斷286
第三節(jié)藥物性神經(jīng)病理性疼痛模型286
第四節(jié)其他疾病引起的神經(jīng)疼痛模型288
一、糖尿病引起的神經(jīng)病變288
二、癌癥疼痛模型289
三、帶狀皰疹后的神經(jīng)痛模型290
第五節(jié)雜項模型291
一、慢性乙醇消費/戒斷引起的神經(jīng)病變模型291
二、吡哆醇引起的神經(jīng)病變模型291
三、三叉神經(jīng)痛模型292
四、口腔疼痛模型293
五、丙烯酰胺誘導的神經(jīng)病變模型293
參考文獻293
第二十二章神經(jīng)心臟學295
第一節(jié)概述295
第二節(jié)神經(jīng)心臟學的解剖和生理295
第三節(jié)神經(jīng)重癥患者的特殊心臟病299
一、心功能障礙和蛛網(wǎng)膜下腔出血302
二、應激性心肌病（takotsubo心肌?。?03
參考文獻303
第二十三章神經(jīng)胃腸病學306
第一節(jié)神經(jīng)胃腸病學研究進展306
一、神經(jīng)胃腸病學概述306
二、功能性胃腸病和羅馬Ⅳ體系308
第二節(jié)神經(jīng)胃腸病學研究方法310
一、測壓技術310
二、放射性核素檢查技術312
三、胃電圖檢測技術314
四、正電子發(fā)射斷層顯像技術316
五、功能磁共振顯像技術316
參考文獻317
第二十四章神經(jīng)腎臟病學318
第一節(jié)概述318
第二節(jié)腎去交感神經(jīng)化治療的臨床應用319
一、腎去交感神經(jīng)化治療在腎功能正?；颊咧械呐R床應用319
二、腎去交感神經(jīng)化治療在CKD患者中的臨床應用319
三、腎去交感神經(jīng)化治療在ESRD患者中的臨床應用319
參考文獻320